Cómo funciona un microscopio de fluorescencia

La microscopía de fluorescencia es un tipo especial de microscopía de luz. Utiliza la capacidad de los fluorocromos para emitir luz después de ser excitados por una luz de cierta longitud de onda. Las proteínas de interés se pueden marcar con dichos fluorocromos mediante tinción de anticuerpos o marcaje de proteínas fluorescentes. Permite determinar la distribución, cantidad y ubicación de una molécula individual dentro de una célula. Además, se pueden realizar estudios de colocalización e interacción, observando la concentración iónica utilizando colorantes de unión reversible, p. Se observan Ca2+ y fura-2, y procesos celulares como endocitosis y exocitosis. Hoy en día, incluso las partículas de subresolución se pueden visualizar con la ayuda de la microscopía de fluorescencia.

El interruptor Stokes

Consideraciones sobre el ajuste de fluorescencia

El accesorio de fluorescencia se puede agregar en el momento de la compra o más adelante. Este es un aspecto importante a considerar al comprar un microscopio. Porque el fabricante puede cambiar el catálogo de los modelos con más o menos regularidad.

Por lo tanto, puede que no sea posible cuando queramos adaptar el sistema de fluorescencia en el futuro. Porque se trata de un equipo obsoleto, o porque el modelo adquirido no tiene oportunidad de adaptarse.

¿Cómo funcionan este tipo de microscopios?

El microscopio de fluorescencia funciona marcando primero la muestra de interés con una sustancia fluorescente, llamada fluoróforo, que luego se ilumina a través de la lente con luz de alta energía. El fluoróforo absorberá la luz y provocará la emisión de luz con baja energía y longitud de onda larga. Esta luz fluorescente se puede separar de la radiación circundante mediante el uso de filtros diseñados para esa longitud de onda específica, lo que permite que el espectador vea solo lo que es fluorescente.

La función más básica es permitir que la luz excitada irradie la muestra y luego separar la luz emitida más débil de la imagen. Primero, el microscopio tiene un filtro que solo deja pasar la radiación que tiene una longitud de onda específica igual a la longitud de onda del material fluorescente. La radiación choca con los átomos de la muestra y los electrones son expulsados ​​a un nivel de energía superior. Cuando están en calma a un nivel más bajo, emiten luz. Para que sea detectable, es decir, visible para el ojo humano, la fluorescencia emitida por la muestra se separa de la excitación más brillante mediante un segundo filtro. Esto funciona porque la luz emitida es de menor energía y tiene una longitud de onda más larga que la que se utiliza para la iluminación.

Fluorocromo

Es una sustancia que básicamente funciona como colorante. Actúa como una especie de marcador de fluorescencia que crea un cierto contraste en la zona de interés para su estudio u observación.

El fluoróforo es una proteína con propiedades fluorescentes. Esto se comporta como un tipo de reflector. Ya que atrae energía con ondas de amplitud corta y las repite con amplitud de onda mayor a las recibidas.

Fluorocromos o colorantes fluorescentes

Los compuestos químicos fluorescentes combinados con moléculas planas o cíclicas suelen ser varios grupos aromáticos. Tiene la capacidad de emitir luz al ser excitado por la luz, creado en muchas versiones. Se suelen modificar para que se unan a la molécula biológica de interés en el estudio.

La luz utilizada en este microscopio es de ciertos tipos específicos para lograr una correcta absorción y posterior excitación del fluorocromo. Por lo que podemos mencionar cuatro tipos que son los más utilizados. Incluye luz LED, lámparas de arco de xenón, láser y lámpara de vapor de mercurio.

Jorge Renteiro
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